重組鵝IFN-α在大腸桿菌中的表達及抗血清制備
摘要：為了研究鵝α干擾素(goIFN-α)基因原核表達產(chǎn)物的反應原性并進行goIFN-α抗血清的制備,試驗首先根據(jù)大腸桿菌偏愛密碼子對goIFN-α基因進行優(yōu)化,隨后采用PCR方法擴增goIFN-α編碼序列并進行同源性分析。將goIFN-α片段與表達載體pET-28a連接,構建重組表達質(zhì)粒pET-28a-goIFN-α,然后將重組表達質(zhì)粒轉化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞中,經(jīng)IPTG誘導后進行SDS-PAGE和Western-blot檢測。通過切膠回收的方法回收目的條帶,將碾碎的蛋白膠與PBS混合后注入小鼠體內(nèi),15 d后回收血清進行Western-blot檢測。結果表明:試驗成功擴增出goIFN-α基因;與多種IFN-α基因序列進行比較,goIFN-α基因氨基酸序列的同源性為92.5%~98.1%;隨后成功構建出重組表達質(zhì)粒pET-28a-goIFN-α,并將其轉化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞中,重組蛋白goIFN-α的分子質(zhì)量約為18 ku,具有良好的反應原性;回收血清進行Western-blot檢測,鼠抗goIFN-α血清制備成功。說明重組goIFN-α蛋白能夠在大腸桿菌中表達,大小符合預期且具有良好的反應原性,并成功制備出鼠抗goIFN-α血清。
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黑龍江畜牧獸醫(yī)雜志
黑龍江畜牧獸醫(yī)雜志， 半月刊，本刊重視學術導向，堅持科學性、學術性、先進性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：探討與研究、畜牧科學、獸醫(yī)科學、飼草、飼料與添加劑、動物保健品研究、信息、特種動物研究、教育與教學等。于1958年經(jīng)新聞總署批準的正規(guī)刊物。
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