擬南芥細(xì)胞周期基因AtCDC5的功能研究及抗體制備
摘要：MYB相關(guān)CDC5(Cell division cycle 5)蛋白對于細(xì)胞周期G2期的正常進(jìn)行是必須的,但是在植物中對這種蛋白質(zhì)的研究還較少涉及。本試驗(yàn)測量比較野生型擬南芥(Col-0生態(tài)型)和AtCDC5T-DNA插入缺失突變體(GK_278B09)的主根生長速度和長度,利用瞬時(shí)表達(dá)AtCDC5-GFP研究AtCDC5在擬南芥葉片葉肉細(xì)胞中的定位,同時(shí)利用AtCDC5N端144個(gè)氨基酸在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)和純化,免疫家兔獲得針對AtCDC5的多克隆特異性抗體,從表型、細(xì)胞和蛋白質(zhì)水平研究AtCDC5基因的功能。結(jié)果表明,GK_278B09的主根因發(fā)育受到抑制而生長速度緩慢;AtCDC5-GFP融合蛋白主要定位于細(xì)胞核中;經(jīng)過分離得到的AtCDC5蛋白抗血清能夠有效地檢測出10ng原核表達(dá)的AtCDC51-144抗原,并在原生質(zhì)體AtCDC5過表達(dá)體系中檢測出1條分子量約為120000的條帶,此條帶與AtCDC5-GFP大小相近。本研究成功制備出AtCDC5蛋白的多克隆抗體,為進(jìn)一步研究AtCDC5蛋白影響細(xì)胞周期從而影響植物生長發(fā)育提供了研究基礎(chǔ)。
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