人胃癌HGC-27細胞中過表達生物鐘蛋白CRY1對細胞內(nèi)cAMP生成的抑制作用
作者：黃錢武; 徐蕾 皖南醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院; 安徽蕪湖241002
摘要：目的建立穩(wěn)定過表達生物鐘蛋白CRY1的人胃癌細胞系,并檢測CRY1過表達對細胞內(nèi)cAMP生成造成的影響。方法克隆CRY1基因,構(gòu)建出過表達CRY1基因的慢病毒穿梭質(zhì)粒。制備并濃縮過表達CRY1的慢病毒顆粒,用其感染人胃癌HGC-27細胞,篩選獲得穩(wěn)定過表達CRY1的細胞系。對過表達CRY1的細胞及未過表達的對照組細胞給予異丙腎上腺素(isoproterenol,ISO)刺激,檢測兩組細胞內(nèi)c AMP含量的變化的差異。結(jié)果成功構(gòu)建過表達生物鐘蛋白CRY1的人胃癌細胞系。Real-Time RT-PCR結(jié)果顯示,相對于對照組,過表達組細胞內(nèi)CRY1 mRNA表達量高出約64倍。Western blotting結(jié)果顯示,相對于對照組,過表達組細胞內(nèi)CRY1蛋白表達量高出近4倍。在受到ISO刺激后,過表達組細胞的c AMP的生成量相對于對照組明顯較少。結(jié)論在人胃癌HGC-27細胞中過表達生物鐘蛋白CRY1,顯著抑制了ISO刺激下細胞內(nèi)cAMP的生成。
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齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報雜志
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