樹鼩IgE高親和力受體α亞基單克隆抗體的制備及鑒定
作者：張晶晶; 肖紅劍; 龍瓊; 浦滔; 李智華; 寸韡 中國醫(yī)學科學院、北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所、云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點實驗室; 云南昆明650118
摘要：目的:制備抗樹鼩IgE高親和力受體α亞基(FcεRIα)的單克隆抗體,并對其免疫學特性進行檢測。方法:采用大腸桿菌原核表達樹鼩IgEFcεRIα蛋白,經(jīng)過純化后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾細胞與Sp2/0細胞融合;通過ELISA法和有限稀釋法篩選雜交瘤細胞;利用Protein A純化單克隆抗體,Western印跡檢測其特異性,間接免疫熒光及免疫組化對單克隆抗體進行分析。結(jié)果:用純化的樹鼩IgEFCεRIα蛋白免疫小鼠,選取效價高的小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞Sp2/0融合,經(jīng)過3輪亞克隆篩選,篩選出5株抗樹鼩IgE FCεRIα單克隆抗體,分別命名為HC020、HC021、HC022、HC023和HC024,細胞間接免疫熒光表明5株單克隆抗體均能檢測到293T細胞中表達的IgE FCεRIα,其中HC020、HC022、HC024能夠通過免疫組化檢測組織切片中的IgE FCεRIα。結(jié)論:制備了5株IgE FCεRIα單克隆抗體,為今后研究樹鼩IgE FCεRIα奠定了基礎(chǔ)。
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生物技術(shù)通訊雜志
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