基于酵母雙雜交技術(shù)的PRR11相互作用蛋白篩選與初步分析
摘要：目的:采用酵母雙雜交技術(shù),篩選PRR11的相互作用蛋白,為深入研究其分子行為機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:構(gòu)建用于酵母雙雜交篩選的PRR11誘餌質(zhì)粒并檢測(cè)其自激活作用,根據(jù)結(jié)果進(jìn)一步構(gòu)建突變體獲得具有較低自激活作用的突變體。對(duì)人胎腦cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選,獲得初始陽(yáng)性克隆。通過(guò)LacZ報(bào)告基因檢測(cè)、回轉(zhuǎn)驗(yàn)證、陽(yáng)性克隆測(cè)序及BLAST序列比對(duì)分析,排除假陽(yáng)性克隆和重復(fù)克隆,確定PRR11的候選相互作用蛋白。結(jié)果:PRR11具有自激活作用,構(gòu)建了一個(gè)較低自激活作用的PRR11突變體。通過(guò)酵母雙雜交篩選,獲得102個(gè)初始陽(yáng)性克隆轉(zhuǎn)化子。經(jīng)LacZ報(bào)告基因檢測(cè),將陽(yáng)性克隆鎖定至39個(gè)。通過(guò)測(cè)序和序列比對(duì)分析,證實(shí)這39個(gè)克隆屬于編碼15種不同蛋白的基因。最終有RNF41等4個(gè)蛋白通過(guò)回轉(zhuǎn)驗(yàn)證。結(jié)論:RNF41、SCG5、BCYRN1和PRR13是PRR11的潛在相互作用蛋白。
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重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)雜志
重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)雜志， 月刊，本刊重視學(xué)術(shù)導(dǎo)向，堅(jiān)持科學(xué)性、學(xué)術(shù)性、先進(jìn)性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：指南與共識(shí)、卵巢癌診治、宮頸癌診治、子宮內(nèi)膜癌診治、少見(jiàn)婦科惡性腫瘤診治等。于1976年經(jīng)新聞總署批準(zhǔn)的正規(guī)刊物。
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